年轻的同治得病不治而亡，立醇亲王奕譞的儿子载湉即位，是为光绪。光绪帝幼时，也喜欢与慈安亲近，仿佛当日的同治帝，慈禧心中渐生不悦。到光绪六年，往东陵致祭，慈安太后因为咸丰帝在日，慈禧尚为妃嫔，不应与自己并列，因此让慈禧退后一点。慈禧不允，几乎争吵起来。后想到在皇陵旁争论，很不雅观，且要招亵渎不敬的讥议，不得已忍气吞声，权为退后。回到宫中越想越气，暗想前次杀小安子，都是恭亲王怂恿，东后赞同，这番恐又是他煽动，擒贼先擒王，除了东后，还怕什么奕訢？但慈安有咸丰的遗诏，不好下手。
先前咸丰帝在热河，临危时，曾密书朱谕一纸，授于慈安。慈安展开遗诏，里面写着：“咨孝贞太后：懿贵妃援母以子贵之义，不得不尊为太后；然其人绝非可倚信者，即不有事，汝亦当专决。彼果安分无过，当始终曲予恩礼；若其失行彰著，汝可召集廷臣，将朕此旨宣示，立即诛死，以杜后患。钦此。”后来因慈禧在宫中太过嚣张，慈安曾取密诏给慈禧，令她警诫一二。而慈禧自然恐惧，从此刻意承欢慈安，几于无微不至。这样几年过后，就把慈安迷惑过去，慈安以为她没什么野心。
东陵祭后，慈禧处心积虑想消灭这道随时能要她命的遗旨，却苦于没法可施。这一天慈安稍有感冒，太医进方没有效，就不再服药，谁知过了数日，竟然不药而愈。慈安后来对慈禧说，服药一点用处也没有。慈禧微笑不语，慈安不觉暗异。忽见慈禧左臂缠着布帛，便问她是什么缘故？慈禧道：“前日见太后不适，进参汁时，曾割了臂上的一片肉与药同煎，聊尽心耳。”慈安听了这句话，大为感动，她流泪对慈禧说：“我不料你竟是如此好人，先皇帝为何怀疑你呢！”竟取出咸丰的遗诏，当着慈禧的面用火焚毁。其实正中了慈禧的阴谋。（此事虽尚无正史材料证明，但流传甚广，当可备一说。）此后慈禧日渐放肆，语多不逊，事事专权，不与慈安协商。慈安开始后悔，然而已经来不及了。但东太后不除，终究是掌权的障碍。
