（第一节）物体表面与空气消毒效果监测
一、物体表面消毒效果监测
液体消毒剂常以喷雾、熏蒸、浸泡或擦拭等方式对物体表面进行消毒。其消毒效果监测，一般多采用染菌样片、自然菌采样和染菌平板测定方法。
1.染菌样片测定法
将染菌样片根据不同的消毒方式，布放于一定的部位。测定喷雾消毒效果时，可将染菌样片按不同位置（水平或垂直）放置于室内具有代表性的各点（地面、桌上、窗台、墙壁等）。测定浸泡消毒效果时，常把染菌样片放人灭菌的小布袋（5厘米x5厘米）内，再将布袋放于衣物的不同部位，随之浸人消毒液内。装样片的小布袋袋口应以线绳扎紧，绳的末端连一小木牌，注明菌片放置的部位。小木牌可露出消毒液外，便于在测定不同作用时间时，单独抽出进行接种。测定擦拭消毒效果时，直接染菌在消毒物品表面即可，染菌时，事先在物品表面划好一定大小的方格，如5厘米x5厘米或10厘米x10厘米，将菌液按定量直接滴染于方格内，涂开，待自然干燥后，进行消毒。
结果检验可按以下步骤进行：（1）将经过消毒处理的染菌样片投人装有0.03M磷酸盐缓冲液5mL（根据消毒剂种类可加人相应的中和剂）的管内。（2）将试管用力敲打80次。（3）用吸管吸取洗液（酌情稀释或原液）lmL作琼脂倾注培养，活菌计数。（4）对照样片除不经消毒处理外，其余皆同试验组。（5）直接染菌于消毒物品表面的，取样方法与“自然菌采样测定法”相同。
杀菌率则根据活菌计数结果，按下式计算：
对照样品平均回收菌数一消毒后样品平均回收菌数、杀困率对照样品平均回收菌数100%
2.自然菌采样测定法
先确定采样部位。将具有代表性的部位，用标准规格板划好10厘米X10厘米的采样方格。消毒前后分别用灭菌棉拭子，蘸取含中和剂的0.03M磷酸盐缓冲液，于划定的采样方格中来回均匀涂擦采样，将采样后的棉拭子投人装有5毫升含中和剂的上述溶液中进行活菌计数。
3.染菌平板测定法
染菌平板测定法用于经熏蒸消毒处理后物体表面消毒效果的监测，测定步骤如下：（1）制备普通琼脂或血琼脂平板，待凝。（2）取6小时肉汤培养物，以L棒均勻接种于平板表面。（3）将种菌之平板暴露于室内各点。对照则置于另一条件相仿的室内，进行熏蒸消毒。（4）消毒后取出各点之平板，连同对照平板一起放人37T温箱内，培养2448小时，观察结果。
二、空气消毒效果监测
室内空气微生物学监测就是通过空气采样、细菌培养，来了解公共场所空气中所含微生物数量，以便有的放矢地采取措施。此外，通过对某种消毒措施使用前后的采样及分析，来评价消毒效果。根据采样原理可将采样方法分为沉降、固体撞击、液体冲击和过滤四种。
（一）沉降法
按沉降机制可分为重力沉降、静电沉降和热沉降三种。应用重力沉降作用捕获空气中的气溶胶粒子是沉降法采样中最简便的方法。采样时，将5个普通营养琼脂平板分别置于室内四角及中央，然后将平板盖打开，暴露5分钟后，将平板放37°培养24小时，计数菌落数。采用奥氏公式，将所得菌落数换算成浮游菌数，根据公式测算，5分钟在100cm2面积上降落的细菌数，相当于10L空气中所含细菌数。
此法目前在国内仍广泛使用，但国外已很少用，主要由于此法只能采集到10微米左右的大粒子，而且不能准确地计算出每立方米空气中的含菌量。
（二）固体撞击法
即利用外力使悬浮在空气中的微生物粒子撞击到固体培养基的表面上。目前这种采样器有以下三类。
1.裂隙式采样器
微生物气溶胶通过一狭窄裂隙后将微生物撞击在其下旋转的固体培养基上。这是目前世界各国广泛使用的一种采样器。国内使用较普遍的有以下两种：
（1）JWL型空气微生物采样器。这是由军事医学科学院研制的，目前有两种型号。这种采样器的采样头一般是固定在整机上，也可以拿在手上，所以适用范围较广，既可作一般微生物监测，又能作特定区域的来样。采样后将培养皿直接放培养箱培养，使用方便。
（2）SS一1型浮游细菌采样器。这是由同济大学研制的。此采样器的优点是捕获微生物的效力高。缺点是比较重，而且噪声较大。
JWL型空气微生物采样器的采样流量可以随需要而调节，SS一1型浮游细菌采样器的采样流量固定为21L/分钟。
2.离心式采样器
由建筑科学院、解放军302医院根据国外RCS采样器原理，采用国产元件研制的LWC一1型离心式空气采样器，通过采样头蜗壳内叶轮高速旋转，把前方40厘米以内的空气吸人壳内，空气中微生物粒子随叶轮旋转后受离心力作用撞击在蜗壳周边含有固体培养基的塑料基条上，然后取出塑料基条，直接培养，计数菌落。
3.筛孔式采样器
安德森空气微生物采样器是由美国Andeson研制的一种筛孔式撞击采样器。它由6个相叠的铝制筛孔圆盘组成。每个圆盘有直径不等的100个小孔，当空气以较大流速通过小孔时，将微生物撞击在小孔下的固体培养基上。由于小孔的孔径自上盘到下盘逐渐减小，使通过小孔的流速也逐渐加速，撞击在固体培养基表面上的粒子也由大到小。所以这种采样器除了可测定空气中微生物含量外，还可同时作粒谱分析。我国军事医学科学院已仿制成此采样器。
使用撞击原理制成的各种采样器的特点是不需要附加设备就可直接采样，所以使用方便。但是，这类采样器所采集到的是空气中微生物颗粒，而不是微生物数量。因此，如果空气中的微生物数很多，如人工污染菌，很可能有多个微生物结成一个颗粒。这样，就不能准确地测定出空气中微生物数量，所以这类采样器更适合于对空气中的自然菌采样。
（三）液体冲击法
通过真空栗抽气，使含微生物的气流以足够的线速度冲击在采样器的采样液中而将它们捕获，菌团颗粒在冲击中被打碎成单个菌体，然后测定液体中的微生物浓度。所以这类采样器测定的微生物浓度较为准确。全玻璃液体冲击采样器就是采用这种原理制成的采样器。这种采样器由于本身不带真空栗，所以携带不方便，一般多用于实验室内，对于人工污染菌的采样。
（四）过滤法
通过真空栗抽气，空气穿过滤膜，空气中微生物粒子阻挡在滤膜上，然后把滤膜放在固体培养基上增养。NF一45型空气微生物采样器就是根据这种原理制成的。
上述空气微生物采样方法，都适合于消毒前、后的空气微生物采样。结果判断时，比较消毒前、后计数的菌落数，由之计算杀灭率。
（第二节）热力灭菌、紫外线消毒和环氧乙烷灭菌效果监测
一、热力灭菌效果监测
（一）干热灭菌效果监测
干热灭菌器灭菌效果的监测，一般可采用物理或化学法测试温度，也可采用微生物杀灭试验来直接测定灭菌效果。一般烤箱均装有温度表，可直接读出灭菌箱内的温度。无需采用化学法测试。但为了直接观察灭菌效果，可采用定性试验进行检查。所用菌株为枯草杆菌黑色变种ATCC9372株芽孢，菌株抵抗力指标为：D值=1.31.9分钟，ST值.3.9分钟，KT值<19分钟。芽孢菌片污染菌量：5x1055x106个/片。测试温度为160U2T。试验方法为定性载体试验。测试60片，全部无菌生长为灭菌合格。菌片应放在灭菌物品内，测定位置应能指示灭菌的上、中、下等不同位置。灭菌器出厂前，应作全面检查，包括灭菌试验，而在使用时，不必每次都作全面检查，只要每半年或1年作一次生物学效果检查即可。
（二）压力蒸气灭菌效果监测
1.物理法
一般灭菌器均带有温度指示表，可直接观察到内室和夹层温度。但为防止指示温度和实际温度不一致，可采用留点温度计进行测试。测试时，将留点温度计放在最难达到灭菌的部位。
2.化学法
该法是采用化学指示卡或指示带进行测试，当温度达到要求温度时，指示卡（带）变色，则表示已达到了灭菌温度和时间。目前我国应用的化学指示卡种类很多。指示带中应用较多的是3M胶带。
3.生物法
美国药典第21版要求，用于压力蒸汽灭菌的指示菌株为嗜热脂肪杆菌芽孢ATCC7953株和12980株，而我国目前应用较多的是SSK31株。对试验菌抵抗力的要求是：D值=1.31.9分钟，ST值.3.9分钟，KT值<19分钟。测试温度为12代±0.5t，菌片染菌数为5x1055x106个/片。试验方法为定性载体试验。测试60片，全部杀灭为灭菌合格。
二、紫外线消毒效果监测
紫外线消毒效果监测可用物理、化学和生物学的方法进行测定，而应用最为普遍的方法是物理监测和化学监测。
（一）物理监测法
常用的仪器是紫外线强度测定仪，其中心波长为254纳米，紫外光源福射的波长为253.7纳米。普通紫外线灯（30瓦）在距离灯下垂直lm处测定（特殊紫外线灯在推荐使用的距离处测定），以辐射强度！70w/cm2为合格，不合格者应及时更换。
注意事项：
（1）测定条件为电压220伏，温度20°，相对湿度<60%。
（2）所用紫外线强度测定仪必须经过标定。
（3）测定时以紫外线灯开灯5分钟后的稳定强度为所测紫外线灯的辐射强度。
（二）化学测定法
在没有紫外线强度测定仪的单位，也可用化学指示卡测定，作为紫外线灯辐射强度的参考值。该指示卡是根据紫外线光敏涂料可随照射强度呈相应色变的原理，结合实用条件下要求的照射剂量研制而成。该指示卡不仅可判断紫外线灯管辐射强度是否合格，还可判断照射剂量是否达到消毒要求。
测定强度时将卡片置于离紫外线灯管下垂直1米处的中央，图案一面朝向灯管，照射1分钟（照射时间应准确）。照射后，图案正中涂层由白色变为紫红色，以之判定灯管的辐射强度。
测定紫外线消毒剂量时，以卡片按实用要求放于紫外线灯下照射，距离与时间随需要而定，当中间光敏涂料的颜色变至与某一相应色块相同，就说明所接受的紫外线照射剂量已达到该项消毒要求。
光敏涂料变色后，时久会变淡。为备以后查后，可将判断结果记录在指示卡上。没用过的指示卡平时应用黑纸包装，防日光照射，并放冰箱内4°保存。
三、环氧乙烷灭菌效果监测
20世纪90年代以来，利用环氧乙烷对医疗器械、一次性医疗用品、公共场所公用物品等的消毒，己被广泛应用，其消毒效果的监测也备受人们关注。目前监测环氧乙烷消毒效果的方法分为化学测试法和生物学测试法。
1.化学测试法
该法是利用化学指示卡进行测试，化学指示卡是根据镁盐与环氧乙烷作用生成氢氧化镁，使PH值增高的原理，利用颜色变化指示出环氧乙烷的作用剂量和作用时间。测试时将化学指示卡放在消毒物品的中央。消毒完毕后（待环氧乙烷巳排净）取出化学指示卡，观察其颜色变化，以了解环氧乙烷穿透情况和分布均匀性，从而判定消毒效果是否达到合格要求。
2.生物学测试法
以枯草芽孢杆菌黑色变种（ATCC9372株）为指示菌，多用于消毒鉴定实验室评价利用环氧乙烷作为消毒剂的消毒柜（或袋）的消毒效果鉴定试验。
